· полиакриламидgel бояд бо мономери акриламид, маводи ибтидоии полимеризатсия, катализатор ва ҳуқуқи намак ва омехтаи буферӣ якҷоя карда шаванд.
· акриламидва BIS (N, N '- акриламиди дукаратаи метилен) матритсаи гелии мономер мебошад.
· Персулфат аммоний раванди полимеризатсияи илтиёмиро оғоз мекунад. Барои тайёр кардани ширеше, маҳлули 10% персулфат аммонийро дар об омода кардан лозим аст. Аксарияти маълумотҳо зарурати истифодаи фаъолро нишон доданд. Бо вуҷуди ин, маҳлули 10% метавонад дар 4℃ барои чанд ҳафта бе талафоти назарраси фаъолият ҷойгир карда шавад. То 10 мл тайёр кунед ва вақте ки ширеше ҷамъ нашавад, партоед.
Маслиҳат: Фоизиакриламиддар пайдарпаии ширеш ва ширеше сафеда якхела нест. Агар акриламиди пешакӣ тайёршуда истифода шавад: маҳлули BIS, боварӣ ҳосил кунед, ки шишаи дурустро гиред.
· TEMED (N, N, N ', N '- тетраметил этилендиамин) катализатор аст, ки дар шишаи қаҳваранг дар яхдон ҷойгир карда шудааст. Танҳо пеш аз рехтани ширеше илова кунед.
· шишаи электрофорези полиакриламидӣ, ки дар электрофорез истифода мешавад, бояд пеш аз ва баъд аз ҳар дафъа шуста шавад. Пас аз электрофорез, бо хасу матои мулоим дар оби собуни гарм бишӯед, бо оби собун бишӯед ва хушк кунед.
· намӣ ва чанг метавонад бо полимери холӣ боиси. Пеш аз электрофорез, пластинкаи шишагиро бо асбоби шишагин тоза кунед ва онро бо хасу нарм пок кунед. Бо оби тозашуда бишӯед ва бо рӯймолчаҳои коғазӣ бодиққат хушк кунед. Пеш аз пок кардан бо коғаз бо 70% этанол шустан ба тоза кардан ва тезонидани хушккунӣ кӯмак мекунад. Намунаҳои акриламидро пай дар пай илова кунед: BIS, об, маҳлули буферӣ, персулфат аммоний, TEMED. Хуб ҷунбонда, фавран рехт.
Пеш аз полимеризатсия дегаз кардани полиакриламид шарт нест. (Акриламид барои тоза кардани футурҳо дар вакуум ҷойгир карда мешуд, зеро оксиген полимеризатсияро бозмедорад.)
Маслиҳатҳои намунавии нуқтаи ширеши уфуқӣ.
· Як пораи коғази сиёҳро дар қуттии поён гузоред, заминаи сиёҳро барои сохтани сӯрохи намунавӣ барои равшантар дидан.
· зарфи ширеше буфер пур, танҳо дар болои коллоид.
· агар канораш чароғ дошта бошад, чароғҳоро фурӯзон кунед, бигзор нури коллоидӣ равшан шавад. Намунаро ба пипетка кашед.
· бо истифода аз дастгоҳи автоматии пикеткашӣ.
· дар 10-200 м1 нуқтаи ҳаракати моеъро дар аксари нуқтаҳои намуна истифода бурдан мумкин аст. Барои сӯрохиҳои намунавии хеле хурд (камтар аз 10μ1), сари пипеткаи дароз, ки барои пайдарпайии ширеше истифода мешавад, қулайтар аст.
· пипетинг, ки танҳо ба намуна ғарқ карда шудааст, нафаскашии моеъи оҳиста ҳаракаткунанда. Намуна метавонад бо глицерин часпанда ба назар расад ва насоси босуръат метавонад футурҳои ҳаворо ба сари пипетка кашад.
· Намунаҳо пас аз нафаскашии сари пиптинг сари моеъро бо нармӣ дар канори қубур ҳаракат мекунанд ё коғази поккунӣ сари моеъро берун аз қатраҳо мемаканд. Эҳтиёт бошед, ки намунаро нахӯред.
Намунаро дар сӯрохи намуна ҷойгир кунед
· Дастгоҳи пипетинг барои нигоҳ доштани фишори каме, водор кардани намунаҳо каме ҳаракат кардани сари моеъ.
· сари пиптинг, ки ба буфер гузошта шудааст, каме баландтар аз сӯрохиҳои нуқта, фишори мусбатро нигоҳ доред. Нӯги пипеткаро ба сӯрохии хурд андохтан мумкин аст.
· оҳиста ва бемайлон намунаҳоро берун кунед. Нӯги пипетка дар болои сӯрохи намунаи нуқта ҷойгир карда мешавад ва намуна ба сӯрох ғарқ мешавад. Бигзор намуна ғарқ шавад, то сӯрохи намунаро пур кунад, ба ҷои тела додан.
· вақте ки қатраи охирини намуна бо сари моеъ, моеъ ба пои дуюм мегузарад, ҳаракати моеъро оҳиста баланд мекунад, аз буфер берун мешавад.
Намунаи ширеши амудиро чӣ гуна бояд кард?
· сӯрохиҳои намунаи нуқтаи ширеш амудӣ байни ду дона шиша ташкил. Дар ширеши хеле тунук, сари пипеткаро ҳатто байни ду табақи шишагӣ гузоштан мумкин нест. Глицеринро тамошо кунед! Сари пипеткаро болои сӯрохи намуна гузоред ва намуна ба сӯрох ғарқ мешавад.
· намунаи нуқтаи пеш, боварӣ ба гузошта нуқтаи амудии сӯрохи намуна gel polypropylene acyl аст, тоза дањонро. Акриламиди полимеризатсияшуда ва оберо, ки дар қаъри сӯрохи намуна пайдо шуда метавонанд, бишӯед. Об метавонад сӯрохи намунаро ба таври назаррас хурдтар кунад. Сӯзандоруи 25 мл ё 50 мл ва сӯзани 18-кабагро истифода баред. Ба буфери электрофорез резед ва сӯрохи намунаро бодиққат шуед.
· дидани сӯрохи намуна душвор буда метавонад, аммо дар баробари ин, боқимонда осон аст. Агар сӯрохиҳои зиёдатӣ вуҷуд дошта бошанд, буфери намунаро бо бромофеноли кабуд санҷидан мумкин аст.
Вақти фиристодан: Март-31-2023